Fast Assay Screening Tool for Foodborne Path

La rilevazione rapida e affidabile di patogeni di origine alimentare rappresenta una priorità strategica per la sicurezza della filiera agro-alimentare. I metodi convenzionali (colture microbiologiche, PCR, ELISA) garantiscono elevata accuratezza analitica, ma risultano limitati da tempi di risposta lunghi, necessità di infrastrutture di laboratorio e costi operativi elevati.

Negli ultimi anni, i test immunocromatografici a flusso laterale (Lateral Flow Assay, LFA) hanno assunto un ruolo crescente come strumenti diagnostici rapidi, portatili e a basso costo. Tuttavia, la maggior parte dei sistemi disponibili consente la rilevazione di un singolo patogeno, con limitata capacità di analisi simultanea.

Il progetto FAST-PATH si colloca in questo contesto tecnologico, con l’obiettivo di sviluppare un sistema LFA multiplex per la rilevazione simultanea di Staphylococcus aureus, Escherichia coli O157:H7 e Clostridium perfringens in matrici alimentari, migliorando tempi di analisi, efficienza operativa e capacità di monitoraggio lungo la filiera produttiva.

Le attività progettuali sono state articolate in cinque Work Packages (WP):

• WP A – Selezione dei biorecettori (completato)
  Identificazione e validazione di coppie anticorpali ad alta affinità e specificità per i patogeni target, con minimizzazione della cross-reattività.
• WP B – Ottimizzazione componenti LFA (in avanzato stato)
  Selezione e caratterizzazione dei materiali (membrane, pad, coniugati) per garantire adeguata cinetica di migrazione, stabilità del segnale e robustezza del sistema.
• WP C – Valutazione prestazioni test LFA singoli (in fase avanzata)
  Analisi di sensibilità, specificità, stabilità del sistema e comportamento di migrazione del campione.
• WP D – Sviluppo e validazione formato multiplex (in corso)
  Ottimizzazione della configurazione multi-linea e valutazione della sensibilità analita-specifica, stabilità del segnale e assenza di interferenze tra target.
• WP E – Ottimizzazione pretrattamento matrici alimentari (in corso)
  Definizione delle condizioni di estrazione e disgregazione per garantire compatibilità chimica con il sistema LFA e riproducibilità su differenti matrici alimentari.

Nel corso del progetto sono stati conseguiti i seguenti risultati principali.

• Completata la selezione dei biorecettori specifici per tutti i patogeni target, con elevata affinità e assenza significativa di cross-reattività.
• Ottimizzati i componenti fondamentali del sistema LFA, con miglioramento della stabilità del segnale e della robustezza della linea di controllo.
• Avanzata la validazione analitica dei test LFA singoli, con conferma della corretta cinetica di migrazione e avvio della caratterizzazione di sensibilità e specificità.
• Sviluppata la configurazione preliminare del sistema multiplex per la rilevazione simultanea dei tre patogeni target.
• Definite condizioni preliminari di pretrattamento delle matrici alimentari compatibili con il sistema LFA e idonee a ridurre interferenze chimiche.

Sono state riscontrate alcune criticità operative, principalmente legate alla disponibilità dei reagenti e ai tempi di reclutamento del personale, che hanno determinato un parziale slittamento di alcune attività sperimentali, senza tuttavia compromettere il raggiungimento degli obiettivi progettuali.